Incubación de células: Está implementando técnicas de desinfección adecuadas?

4 PREGUNTAS A RESPONDER ANTES DE REALIZAR SUS EXPERIMENTOS CON CULTIVOS CELULARES

Las células de mamífero o el cultivo de tejidos son muy dependientes de las condiciones ambientales específicas. Condiciones, tales como los proporcionados por una incubadora de CO2, que permite que las células crezcan y funcionen como si estuvieran en similares condiciones al  entorno natural, del que derivan. Un factor clave en el cultivo exitoso de células es impidir la interferencia microbiológica en la cultura. Este sigue siendo un obstáculo importante para el científico, ya que los microorganismos, por naturaleza, son omnipresentes. Las bacterias viven alla través de nuestros cuerpos, y estamos constantemente trayendo virus ambientales, Micoplasma, mohos y hongos – todas destructivos para las células de mamífero en cultivo (2). Otro desafío para los científicos de cultivo celular es mantener una línea celular pura. La contaminación cruzada entre las líneas celulares es un problema común en los laboratorios, obteniendo resultados sesgados y errores de identificación. (2)

 

La técnica aséptica es una colección de métodos y procesos de laboratorio que tienen como objetivo eliminar la introducción de microorganismos a los cultivos de células y prevenir la contaminación cruzada. Es fundamental seguir metódicamente y constantemente aspectos de la técnica aséptica a través de todos los equipos, reactivos, y células; dentro de una instalación de cultivo de células. Con esto, se pueden mantener las condiciones estériles adecuadas y las posibilidades de contaminación perjudicial serán raros.

 

P: ¿Cuál es la práctica de laboratorio general más importante al emplear una técnica aséptica con éxito?

R: El aprendizaje e implementación de una técnica aséptica requiere la comprensión y aplicación de un conjunto de protocolos, tales como la manera correcta de abrir las botellas o pipeteado de medios de cultivo. Sin embargo, la única constante para mantener siempre en mente es que todo lo que entra en contacto con el cultivo celular debe ser estéril. Si una sustancia o pieza de equipamiento no ha sido estérilmente envasada o ha sido expuesto a un entorno de laboratorio externo, no debe ser utilizado hasta ser esterilizado adecuadamente.

P: En mi laboratorio se  llevan a cabo muchos tipos de experimentación. ¿Cuál es el mejor espacio para aquellas que requieren de una técnica aséptica?

R: Si es posible, dedicar una pequeña área o gabinete para el cultivo de células. No use este espacio para cualquier otro procedimiento de laboratorio, especialmente si su laboratorio está creciendo bacterias tales como E. Coli para las transformaciones de clonación. Esta área debe contener idealmente cabinas de flujo laminar y una incubadora de CO2. El flujo laminar debe ser la única área en la que se abren los frascos de cultivo. Implemente una regla de laboratorio, que todo científico y técnicos deben usar una bata de laboratorio limpia en esta sala; otra vez, dedicar una bata de laboratorio específica para fines de cultivo de tejidos. Si un recinto no está disponible en su instalación, limitar el tráfico a pie, discusiones de laboratorio, y la socialización, cerca de la zona de cultivo de células. Menos tráfico, significa menos posibilidades para la introducción de microbios. (3)

P: Una gran cantidad de equipos y la mesada están expuestos a bacterias / microorganismos ambientales. ¿Cuál es la mejor manera de desinfectar estos elementos para mi cultivo de tejidos?

R: Antes de manipular cultivos celulares, todas las mesadas y superficies aledañas a su área de cultivo de tejidos, deben ser desinfectados de manera regular.

Si el laboratorio de cultivo celular no se ha utilizado durante un tiempo, es una buena idea limpiar superficies con una solución de etanol al 70% + 2% de fenol, para garantizar la plena descontaminación (1). Deje que la solución trabaje en las superficies durante varias horas o toda la noche.

En las instalaciones de cultivo celular de uso frecuente, mesas de trabajo y superficies de alrededores deben ser desinfectados con un 70% de etanol, también.

En ambos casos, preste especial atención a los posibles puntos de acumulación de microbios, tales como el baño de agua. Esta zona, caliente y húmeda, debe ser limpiada y desinfectada regularmente.

Limpieza de una incubadora es también de suma importancia para mantener limpia el área donde las células pasan 95% de su tiempo: el interior de su incubadora.

Las incubadoras son un entorno ideal para el crecimiento de microorganismos. Si estuviera disponible, utilizar el sistema de respaldo de control de contaminación de manera diaria.

Por ejemplo, las incubadoras de Panasonic CellQ proporcionan un control superior de la contaminación ya que  permiten la destrucción de contaminantes del aire in situ, utilizando la tecnología UV, segura para sus células. A medida que sus células crecen dentro de la cámara de la incubadora, el sistema de control de la contaminación proporciona protección germicida para organismos del aire sin costosos tiempos de inactividad o de daño a las células de cultivo. Esto eliminará los contaminantes de la totalidad de la incubadora. Un protocolo UV de 24 horas está disponible para la descontaminación durante la noche, o después de la limpieza total o service de la cámara.

P: Tengo una línea celular sensible. ¿Qué precauciones debo tomar antes de realizar pasajes de células?

R: En primer lugar, asegúrese de haber descontaminado las superficies circundantes.  Dese tiempo suficiente antes de comenzar su trabajo. Para crear un ambiente ideal dentro de la campana de flujo laminar, encienda la luz UV durante al menos 20-30 minutos antes de abrirla. Para crear un flujo de aire adecuado, deje que el flujo laminar trabaje al menos 10 minutos antes de poner cualquier material dentro. Antes de entrar en la superficie de trabajo, rocíe las manos enguantadas con etanol al 70% y deje actuar durante unos minutos antes de limpiarlo con un paño estéril. Del mismo modo, descontaminar todo el equipo / material que ingrese debajo del flujo, como una pipetas de mano y cajas de puntas. Asegúrese de que la tapa de todos los frascos de cultivo y  botellas de reactivos estén debidamente cerradas antes de la pulverización con etanol – es importante que ninguna solución de etanol entra en contacto con los medios de cultivo/ reactivos que entrarán en contacto con las células.

 

Trabajos citados:

  1. Hans G. Drexler CC (2002) Mycoplasma contamination of cell cultures: Incidence, sources, effects, detection, elimination, prevention. Cytotechnology, 39, 75-90.
  2. John M Davis, K. L. (2013) Cell Culture, Aseptic Techniques. In M.C. Flickinger (Ed), Upstream Industrial Biotechnology: Expression systems and process development (pp 49-69) John Wiley & Sons, Inc.
  3. John Ryan, J. M. (2011). Helpful Hints for better aseptic technique. Retrieved from Bionique Testing Laboratories, Inc.


 

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